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微孔板恒溫振蕩器在牛奶抗原抗體反應(yīng)的應(yīng)用

更新時(shí)間:2011-09-22   點(diǎn)擊次數(shù):4436次

溶液的配制

 

1、稀釋抗體溶液:將抗體濃縮液搖勻,用緩沖液10倍稀釋抗體濃縮液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

 

2、稀釋酶結(jié)合物:將酶結(jié)合物濃縮液搖勻,用緩沖液10倍稀釋酶結(jié)合物濃縮液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

 

3、底物溶液的配制:用底物緩沖液10倍稀釋底物濃縮液,根據(jù)需要的量現(xiàn)用現(xiàn)配,底物溶液變藍(lán)禁止使用。

 

七、樣品的前處理方法:

 

    牛奶:新鮮牛奶或解凍牛奶50µL,加水950µL,1:20稀釋,作樣品液備用。

 

八、檢測(cè)步驟:

 

1、剪開(kāi)錫箔袋,按每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液和樣品提取液2孔計(jì)算所需微孔板條的數(shù)量,插入框架。

 

2、各取系列標(biāo)準(zhǔn)液和樣品液20µL分別加到其對(duì)應(yīng)微孔中,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品加雙孔。

 

3、每孔加稀釋好的酶結(jié)合物20µL。

 

4、每孔加稀釋好的抗體100µL,在MicBio-IV微孔板恒溫振蕩器上*混勻,用封口膜封好,室溫孵育30分鐘。

 

5、倒出孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍打,使孔中沒(méi)有殘留的液體。使用多道移液器,每孔加水250µL,再傾倒干凈。如此洗板,重復(fù)三次。

 

6、每孔加底物溶液100µL,室溫避光孵育30分鐘。

 

7 、每孔加終止液100µL,混勻。

 

8 、在450nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度值。60分鐘內(nèi)讀數(shù)。

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